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蛋白质检测(九)

                    

蛋白印迹法

六 显色

酶和底物反应显色是蛋白印迹法的最后一步,一般常用酶有HRPAP,根据成像底物可分为显色底物和发光底物。发光底物可选用HRP标记二抗,显色底物可选用HRP标记二抗或AP标记二抗。显色分为酶促底物发光和化学发光或荧光法。

 

1.HRP标记二抗

(1)酶促底物发光法

DAB显色液配制:50ml配方如下。

DAB

1mol/L Tri-HCL(pH 7.4)

DDW

*现配现用,避光保存。

*显色前每50ml加入30%过氧化氢7.5ul

*敏感性较ECL差。DAB是致癌物质,配制时应戴手套。显色后膜可用DDW清洗,风干保存。

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