RNA 标准转录体系的一般回收率为 lugRNA/ug 质粒 DNA, 使用下面的方法，可以提高回收率至 5〜l0ug RNA/ug 质粒 DNA。大量制备 RNA 可以用于体外翻译。

实验材料

      模板 DNA 或质粒

试剂、试剂盒

      TE   TE 饱和酚氯仿   异内醇   3mol LNaAc   无水乙醇   5X 转录缓冲液   lOOmmoL LDTT   RNasin   rATP   rGTP   rUTP   rCTP   SF6T3 或 T7RNA 聚合酶   异戊醇   DNase7.5mol L 乙酸铵   无水乙醇   乙醇

实验步骤

一材料与设备

      1) 模板 DNA 或质粒

      2)TE

      3)TE 饱和酚：氯仿

      4) 氯仿：异内醇 (24:1)

      5)3mol/LNaAc(pH5.2)

      6) 无水乙醇
 
      7)5X 转录缓冲液：200 mmol/LTris-HCl(pH7.9),30 mmol/LMgCl2，10 mmol/L 亚精胺,50 mmol/LNaCl

      8)lOOmmoL/LDTT

      9)RNasin

      10)rATP，rGTP,rUTP,rCTP，各 2.5 mmoI/L

      11)SF6,T3 或 T7RNA 聚合酶

      12)TE-饱和的酚：氯仿：异戊醇 (25:24:1,PH4.5)

      13)DNase

      14)7.5mol/L 乙酸铵

      15) 无水乙醇

      16)70% 乙醇

二操作方法


1) 在室温条件下按顺序加入以下组分：

      5X 转录缓冲液                                                      2ul

      DTT，100 mmol/L                                                10ul

      RNasin100U

      rATP,rGTPT,rCTP,rUTP(各 2.5 mmol/L)                   20ul

      线状模板 DNA(1〜2.5 mg/ml)                                2ul

      SP6,T3 或 T7RNA 聚合酶                                     40U

      加无 RNA 酶的水至终体积为                                l00ul

2) 于 37〜40℃ 反应 1 h

3) 按 RNA 标准转录反应所述的方法除去 DNA 模, 纯化 RNA 转录物。

此文转载来源：丁香通