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蛋白质检测(七)

蛋白印迹法

五 抗原-抗体反应

4 二抗的处理

(1)常用二抗:HRP偶联二抗。也可用碱性磷酸酶标记二抗,但不够灵敏。

(2)二抗稀释液:PBS/PBS-T液、TBS/TBS-T液、一般的封闭液等。

(3)二抗稀释倍数:根据二抗说明书推荐倍数稀释二抗。也可按1100-120000常规稀释倍数进行预实验选择最适稀释倍数。如二抗的浓度过高可导致非特异性条带。

(4)二抗孵育时间:一般室温孵育1h

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