动物总RNA的提取
实验目的 学习从动物组织中提取RNA的原理和方法。 实验原理 RNA是一类极易降解的分子，要得到完整的RNA必须最大限度地抑制提取过程中内源性及外源性核糖核酸酶对RNA的降解。高浓度
RNA干扰的详细实验步骤
步骤包括: (一)siRNA的设计 1.在设计RNAi实验时，可以先在以下网站进行目标序列的筛选： Genesil Ambion 2.RNAi目标序列的选取原则： (1)从转录本（mRNA）的AUG起始密码开始，寻找AA二连序列，
利用Trizol法提取植物乳杆菌总RNA
一、实验原理 Trizol的主要成分是苯酚，苯酚的主要作用是裂解细胞，使细胞中的核酸物质得到释放。同时苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此Trizol中还加入了
shRNA干扰载体构建
产品技术背景 pRI系列载体是基于III类RNA聚合酶启动子：人类H1启动子的专用于哺乳动物细胞RNA干扰的载体。H1启动子在哺乳动物细胞内合成类似siRNA分子的小分子RNA。由于H1启动子有精确
核酸的抽提---mRNA提取分离技巧
与rRNA和tRNA不同的是，哺乳动物细胞的绝大部分mRNA在其3端均有一poly(A)尾，因此可以用oligo(dT)－纤维素亲和层析法从大量的细胞RNA中分离mRNAdmonds等，1971;AtLeder，1972）。在构建cDNA文库时
Northern blot实验技术
一、经乙二醛和二甲基亚砜变性处理后进行的RNA电泳 这一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。含有乙二醛－DMSO的凝胶比含有甲醛的凝胶更难于进行电泳，因为前者泳动速率较慢而且需将电
siRNA对照解析
A．普通阴性对照 1.siRNA实验应该有阴性对照； 2.通用阴性对照为与目的基因的序列无同源性的普通阴性对照； 3．Scrambled阴性对照和选中的siRNA序列有相同的组成，但是和mRNA没有明显的
Northern blot实验技术
一、经乙二醛和二甲基亚砜变性处理后进行的RNA电泳 这一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。含有乙二醛－DMSO的凝胶比含有甲醛的凝胶更难于进行电泳，因为前者泳动速率较慢而且需将电
siRNA表达载体
多数的siRNA表达载体依赖RNA聚合酶III启动子(polIII)中的一种，操纵一段45―50nt的发夹结构RNA（smallhairpinRNA,shRNA）在哺乳动物细胞中的表达,shRNA在细胞内会自动被加工成为siRNA，从而引发基
siRNA表达框架
siRNA表达框架(siRNAexpressioncassettes，SECs)是一种由PCR得到的siRNA表达模版，能够直接导入细胞进行表达而无需事前克隆到载体中。这个方法最早是由Castanotto和其同事采用，包括一个RNApolⅢ
